Hatching prévio ou no momento da biópsia?

O teste genético pré-implantacional (PGT) tem sido proposto principalmente como um método para melhorar a seleção de embriões para pacientes com prognóstico ruim para o sucesso da fertilização in vitro (FIV) como nos resultados de falhas anteriores de implantação ou idade avançada.

O momento da biópsia embrionária e o tipo de teste genético realizado mudaram rapidamente com a biópsia do trofectoectoderma no estágio de blastocisto e técnicas abrangentes de triagem cromossômica, melhorando assim os resultados clínicos.

Embora as técnicas dos testes genéticos tenham sido aprimoradas ao longo dos anos, a técnica de biópsia de blastocisto não recebeu a mesma atenção. Dois protocolos foram publicados na literatura para a realização da biópsia do trofoectoderma.

O primeiro método é onde a abertura da zona pelúcida (ZP) é realizada no estágio de clivagem (dia 3), seguida por cultivo estendido até o estágio de blastocisto (dia 5, 6 ou 7), e as células do trofoectoderma são biopsiadas quando se apresentam herniadas através da abertura artificial. Alguns laboratórios (menos usuais) optam até por abrir a ZP no estágio pronuclear durante a verificação da fertilização, ou realizar a abertura no dia 4 de desenvolvimento embrionário, neste estágio de mórula/blastocisto inicial, na tentativa de visualizar a massa celular interna prematuramente.

O segundo método é quando o embrião é deixado em cultivo até o estágio de blastocisto (dia 5, 6 ou 7), e neste estágio a ZP é aberta (no lado oposto da massa celular interna para evitar danos) e a biopsia do trofoectoderma é realizada.

Alguns estudos compararam qual o melhor momento para realizar o hatching para biópsia do embrião (primeiro ou segundo método), e os resultados mostraram semelhança na taxa de embriões euplóides quando abertura da ZP é realizada no dia 3 ou no dia da biópsia. Porém, o número de blastocistos biopsiados congelados e a sobrevivência dos embriões aquecidos se apresentaram significativamente menor quando a abertura da ZP foi realizada no dia 3, favorecendo neste método um impacto negativo em protocolos PGT-A.

A abertura da ZP em dia 3 promove a herniação artificial dos embriões em dia 5, 6 ou 7, facilitando a separação do trofoectoderma no momento da biópsia, por outro lado, expõe os embriões mais tempo fora da incubadora podendo causar alterações no cultivo embrionário e risco da herniação da massa celular interna. Entretanto, o método de abertura da ZP no dia da biópsia, ou seja, no estágio de blastocisto, não envolve nenhuma manipulação no dia 3, e o embrião permanece intacto até o estágio de blastocisto. Além disso, essa estratégia é mais segura para a integridade da massa celular interna já que é possível visualizá-la no blastocisto já formado.

Apesar dos resultados dos trabalhos publicados favorecer p hatching no momento da biopsia embrionária, ambos os métodos são eficazes quando realizados com segurança, habilidade e competência técnica, para isso é preciso avaliar o fluxo de trabalho e experiência do embriologista que executará a técnica para definir qual o melhor método para cada laboratório, ou até mesmo modifica-lo.

 

Referências Bibliográficas

Capalbo A, Rienzi L, Cimadomo D, Maggiulli R, Elliott T, Wright G, et al. Correlation between standard blastocyst morphology, euploidy and implantation: an observational study in two centers involving 956 screened blastocysts. Hum Reprod 2014;29:1173–81.

Capalbo A, Romanelli V, Cimadomo D, Girardi L, Stoppa M, Dovere L, et al. Implementing PGD/PGD-A in IVF clinics: considerations for the best laboratory approach and management. J Assist Reprod Genet 2016;33:1279–86.

Dahdouh EM, Balayla J, García-Velasco JA. Impact of blastocyst biopsy and comprehensive chromosome screening technology on preimplantation genetic screening: a systematic review of randomized controlled trials. Reprod Biomed Online 2015;30:281–9.

Forman EJ, Upham KM, Cheng M, Zhao T, Hong KH, Treff NR, et al. Comprehensive chromosome screening alters traditional morphology-based embryo selection: a prospective study of 100 consecutive cycles of planned fresh euploid blastocyst transfer. Fertil Steril 2013;100:718–24.

McArthur SJ, Leigh D, Marshall JT, De Boer KA, Jansen RPS. Pregnancies and live births after trophectoderm biopsy and preimplantation genetic testing of human blastocysts. Fertil Steril 2005;84:1628–36.

Mastenbroek S, Twisk M, van der Veen F, Repping S. Preimplantation genetic screening: a systematic review and meta-analysis of RCTs. Hum Reprod Update 2011;17:454–66.

Scott RT, Upham KM, Forman EJ, Hong KH, Scott KL, Taylor D, et al. Blastocyst biopsy with comprehensive chromosome screening and fresh embryo transfer significantly increases in vitro fertilization implantation and delivery rates: a randomized controlled trial. Fertil Steril 2013;100:697– 703.

Schoolcraft WB, Fragouli E, Stevens J, Munne S, Katz-Jaffe MG, Wells D. Clinical application of comprehensive chromosomal screening at the blastocyst stage. Fertil Steril 2010;94:1700–6.

Zhao H, Tao W, Li M, Liu H, Wu K, Ma S. Comparison of two protocols of blastocyst biopsy submitted to preimplantation genetic testing for aneuploidies: a randomized controlled trial. Arch Gynecol Obstet 2019;299: 1487–93.

 

 

Sarah Nachef

– Embriologista Sênior Gestora de Laboratório.

– Responsável Técnica Crio Fértil, Consultoria Reprodutiva.

– Membro da Diretoria Pronúcleo, Associação Brasileira de Embriologistas em Medicina Reprodutiva.