Técnicas de Processamento Seminal e seu Impacto nas Taxas de Gestação na Reprodução Assistida

Ana Beatriz Zavan Marques –

 

A qualidade seminal tem importante papel nas taxas de formação embrionária e de gestação. Para melhorar a seleção dos melhores espermatozoides utilizados nas técnicas de reprodução assistida, diferentes métodos de processamento seminal foram e são desenvolvidos.

O processamento do sêmen tem como principal objetivo separar elementos indesejados, como toxinas e contaminantes contidos no sêmen.Isso porque a exposição prolongada dos espermatozoides a esses componentes pode prejudicar sua viabilidade, comprometendo sua capacidade de fertilização. Ao mesmo tempo a utilização dessas técnicas auxilia na seleção de espermatozoides com melhor motilidade e morfologia adequada. A escolha da técnica de capacitação espermática a ser utilizada deve considerar a qualidade seminal e o tratamento a ser realizado, considerando suas indicações e limitações.

 

As técnicas mais comuns utilizadas na prática laboratorial estão listadas abaixo.

 

• Lavagem seminal (Sperm-wash)
• Princípio: consiste na adição de meio de cultura ao sêmen, seguida de centrifugação;
• Objetivo: concentrar espermatozoides;
• Indicações: oligozoospermia severa e astenozoospermia;
• Vantagens: baixo custo e fácil execução;
• Limitações: não seleciona espermatozoides viáveis; células germinativas, leucócitos e debris também ficam retidos no precipitado.

 

• Migração ascendente (Swim-up)
• Princípio: consiste na deposição do sêmen sob camada de meio de cultura, em tubo mantido à 45º;
• Objetivo: seleção de espermatozoides móveis, por sua velocidade de progressão direcional. Pode ser realizada de forma isolada ou associada a outros métodos;
• Indicações: amostras seminais com alta concentração e motilidade;
• Contraindicações: oligozoospermia severa, teratozoospermia e astenozoospermia;
• Vantagens: baixo custo e fácil execução, afeta menos a integridade do DNA espermático do que a técnica de gradiente descontínuo de densidade, amostra final é limpa;
• Limitações: baixa recuperação de espermatozoides (aproximadamente 20% dos espermatozoides móveis da amostra inicial), possível aumento de estresse oxidativo.

 

• Gradiente descontínuo de densidade
• Princípio: sêmen é depositado sobre camadas de soluções de diferentes concentrações de sílica recoberta por PVP (tendo, portanto, diferentes densidades) e em seguida é centrifugado, de forma que os espermatozoides de melhor motilidade ultrapassam as camadas formando um precipitado, enquanto que o plasma seminal, os debris, as células germinativas e os espermatozoides alterados são desprezados junto com o sobrenadante;
• Objetivo: seleção de espermatozoides de melhor motilidade e morfologia;
• Indicações: astenozoospermia, oligozoospermia, teratozoospermia e tratamento de pacientes sorodiscordantes (com dupla lavagem do precipitado e análise de carga viral da amostra processada);
• Limitações: não seleciona espermatozoides de acordo com a integridade de seu DNA;
• Vantagens: recupera mais espermatozoides móveis do que o Swim-up (mas com motilidade final inferior), redução da concentração de espécies reativas de oxigênio;
• Desvantagens: maior consumo de tempo, potencial risco de endotoxinas, maior dificuldade para manter pH e temperatura estáveis.

 

• Separação magnética (MACS)
• Princípio: separar espermatozoides em apoptose dos que não estão em apoptose, utilizando microesferas magnéticas com Anexina V e separação eletroforética;
• Indicações: oligozoospermia, astenozoospermia, taxa de fragmentação de DNA espermático aumentada;
• Vantagens: seleciona espermatozoides de boa qualidade, mantém a integridade do DNA espermático, seleciona espermatozoides não apoptóticos, pode gerar maiores taxas de gestação quando comparada às técnicas de swim-up e gradiente descontínuo de densidade;
• Limitações: não há consenso sobre sua eficácia em comparação ao swim-up e gradiente descontínuo de densidade. Esta técnica ainda está em desenvolvimento e requer otimização de protocolos e avaliação de impacto na qualidade espermática antes de seu uso clínico.

 

• Microfluidica
• Princípio: o sêmen é adicionado ao canal de entrada de uma dispositivo que contém microporos cobertos com meio de cultura, de forma que espermatozoides móveis, com DNA íntegro ultrapassam os microporos, chegando ao meio de cultivo;
• Indicações: amostras com taxa de fragmentação de DNA aumentada;
• Vantagens: reduz a fragmentação de DNA espermático e a concentração de espécies reativas de oxigênio, decorrentes da centrifugação; amostra é mantida em ambiente estável; evita danos mecânicos aos espermatozoides, técnica rápida e de fácil execução;
• Limitações: amostras com baixa concentração de espermatozoides móveis podem não ter recuperação suficiente. Espermatozoides com cabeça diminuída podem passar pelos microporos, de forma que a amostra final não necessariamente contém apenas espermatozoides com morfologia normal, dispositivos podem ter alto custo e não existe consenso sobre seus efeitos nas taxas de gestação na fertilização in vitro.

 

Em relação aos efeitos de cada técnica de processamento seminal nas taxas de sucesso da fertilização in vitro, estudos sugerem que não há diferença significativa entre o processamento por por swim-up ou gradiente descontínuo de densidade.

Acredita-se que o processamento por MACS pode resultar em melhor seleção espermática quando comparada às técnicas de swim-up e gradiente descontínuo de densidade, apesar de suas limitações.

Hoje, a maior questão sobre as técnicas de processamento é em relação à manutenção da integridade do DNA espermático, tendo em vista que espermatozoides com DNA fragmentado podem prejudicar o desenvolvimento embrionário, resultando em menores taxas de gestação saudável e completa. No entanto, necessita-se de mais dados científicos clínicos que sustentem o uso de técnicas que selecionam espermatozoides com DNA íntegro.

Além disso, existem outras técnicas de processamento seminal que são utilizadas para casos clínicos mais específicos, como a seleção de espermatozoides X e Y com o objetivo de evitar doenças ligadas ao sexo e a obtenção de espermatozoides a partir da urina, em casos de ejaculação retrógrada.

A obtenção de um bebê nascido e saudável envolve diversos outros fatores dentro do tratamento, além da análise e do preparo seminal. Ainda assim, a escolha da melhor técnica de processamento seminal, bem como a escolha de melhores espermatozoides vem mostrando como é um processo crítico para o sucesso dos tratamentos de infertilidade/ reprodução assistida.

 

 

 

Leitura recomendada:

 

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